除菌過濾器PUPSIT實施要點(diǎn)及風(fēng)險評估

2025-02-26 13:55:53

在生物制藥領(lǐng)域，無菌過濾工藝是確保最終產(chǎn)品質(zhì)量和安全性的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。其中，用于去除細(xì)菌和控制生物負(fù)荷的除菌過濾系統(tǒng)一直是無菌過濾工藝中的重要環(huán)節(jié)。

PUPSIT定義

根據(jù)EU 新版 GMP 的相關(guān)規(guī)定“8.87 The integrity of the sterilised filter assembly should be verified by integrity testing before use (pre-use post sterilisation integrity test or PUPSIT), to check for damage and loss of integrity caused by the filter preparation prior to use.”

PUPSIT，即“使用前、滅菌后完整性測試”（Pre-Use Post-Sterilization Integrity Test），是無菌制藥工藝中的一項重要測試措施。

由于滅菌過程可能會對過濾器產(chǎn)生影響，如導(dǎo)致微小破損、孔徑變化，或引入“掩蓋缺陷”的風(fēng)險，PUPSIT幫助制藥企業(yè)在生產(chǎn)啟動之前確認(rèn)過濾器是否能有效地過濾微生物和其他顆粒，確保產(chǎn)品的最終無菌性。

實施要點(diǎn)

1. 測試時機(jī)與流程設(shè)計

嚴(yán)格時序：必須在過濾器完成滅菌（如濕熱滅菌、輻照滅菌）后，且在實際使用（如藥液過濾、無菌工藝）前進(jìn)行，避免滅菌后二次污染或操作損傷。

無縫銜接：若滅菌后無法立即測試（如過濾器已安裝于系統(tǒng)），需確保測試前系統(tǒng)處于密閉狀態(tài)，防止外界污染。

2. 滅菌方法兼容性

濕熱滅菌（SIP）：需驗證高溫高壓對濾膜（如PES、PVDF）的影響，避免膜孔徑變形或密封件老化。

輻照滅菌：注意γ射線或電子束可能降低濾膜機(jī)械強(qiáng)度，需通過完整性測試確認(rèn)無損傷。

環(huán)氧乙烷（EO）滅菌：需徹底解析殘留氣體，避免影響測試結(jié)果（如擴(kuò)散流測試干擾）。

3. 完整性測試方法選擇

起泡點(diǎn)測試（Bubble Point）：適用于膜孔徑較大（≥0.2μm）的除菌過濾器，需設(shè)定滅菌前后的閾值（如0.2μm濾膜起泡點(diǎn)≥3.5 bar）。

擴(kuò)散流/前進(jìn)流測試（Diffusion Flow）：更敏感，適用于小孔徑或多層濾膜，需根據(jù)濾膜材質(zhì)和滅菌條件校準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)值。

壓力衰減測試（Pressure Hold）：適用于在線測試，需確保系統(tǒng)密閉性（如管路、接頭無泄漏）。

4. 測試系統(tǒng)設(shè)計

在線測試 vs. 離線測試：

在線測試：直接在生產(chǎn)系統(tǒng)中進(jìn)行，需驗證測試設(shè)備（如完整性測試儀）與工藝管路的兼容性。

離線測試：適用于小型或獨(dú)立過濾器，需確保拆卸-測試-重新安裝過程的無菌性。

自動化集成：優(yōu)先采用自動化測試設(shè)備，減少人為操作誤差，確保數(shù)據(jù)完整性（如電子記錄符合ALCOA+原則）。

5. 驗證與接受標(biāo)準(zhǔn)

滅菌前后對比：需建立滅菌前（出廠）與滅菌后（PUPSIT）的完整性測試數(shù)據(jù)基線，確認(rèn)滅菌過程未導(dǎo)致性能漂移。

接受標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)過濾器廠家標(biāo)定值，結(jié)合工藝驗證數(shù)據(jù)設(shè)定（如擴(kuò)散流≤10 mL/min·cm2）。

失敗處理：若測試失敗，需啟動偏差調(diào)查（是否為滅菌損傷、安裝不當(dāng)或測試誤差），并更換過濾器。

風(fēng)險評估與關(guān)鍵控制

風(fēng)險點(diǎn)：滅菌參數(shù)超限（如溫度過高）、過濾器安裝不當(dāng)（如O型圈損壞）、測試環(huán)境（如非潔凈區(qū)操作）。

控制措施：通過工藝驗證（如滅菌循環(huán)驗證）、操作SOP培訓(xùn)、環(huán)境監(jiān)控（如粒子計數(shù)）降低風(fēng)險。

法規(guī)與文件要求

GMP/FDA合規(guī)：符合FDA《無菌工藝指南》、EU GMP Annex 1（2022）要求，明確PUPSIT為強(qiáng)制步驟。

?歐盟GMP附錄1：2022年發(fā)布的新版附錄1明確要求，在沒有顯著工藝限制（如溶液體積較小）的情況下，制藥企業(yè)必須在使用前對滅菌后的除菌過濾器進(jìn)行PUPSIT測試。這不僅是為了防止微生物污染，還因滅菌過程可能導(dǎo)致濾器的完整性下降，從而影響藥品的無菌質(zhì)量。

?美國FDA：FDA的相關(guān)指南雖然未明確要求所有情況下必須執(zhí)行PUPSIT，但強(qiáng)調(diào)根據(jù)產(chǎn)品特性進(jìn)行風(fēng)險評估，并在必要時執(zhí)行完整性檢測。對于那些無法在滅菌后實施PUPSIT的產(chǎn)品，需基于科學(xué)依據(jù)采取其他風(fēng)險控制措施。

?WHO和PIC/S：全球化的GMP指南如WHO和PIC/S同樣支持PUPSIT，特別是針對出口或跨國銷售的無菌藥品，要求嚴(yán)格執(zhí)行PUPSIT的流程，以確保最終產(chǎn)品質(zhì)量達(dá)到國際標(biāo)準(zhǔn)。