培養(yǎng)基常用的滅菌方法

2022-07-05 17:33:17

培養(yǎng)基常用的滅菌方法

   培養(yǎng)基是適于細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖需要的各種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)人工配制而成的基質(zhì)。按營(yíng)養(yǎng)成分和用途不同，分為基礎(chǔ)、合成、營(yíng)養(yǎng)、鑒別、選擇和厭氧培養(yǎng)基。按物理形態(tài)分為固體、半固體和液體三類。根據(jù)細(xì)菌的種類和培養(yǎng)目的不同，可采用不同的培養(yǎng)基。

1、滅菌方法

    培養(yǎng)基的滅菌方法主要有兩種，濕熱滅菌及0.22μm微孔濾膜過(guò)濾除菌。與過(guò)濾相比，高壓蒸汽滅菌的工作強(qiáng)度小，成本較低但易造成營(yíng)養(yǎng)成分的流失，而且在多次加樣（無(wú)菌谷氨酰胺溶液，無(wú)菌碳酸氫鈉溶液等）過(guò)程中容易造成二次污染。大多數(shù)培養(yǎng)基采用0.1～0.2μm孔徑的微孔濾膜進(jìn)行過(guò)濾除菌，并且已成為培養(yǎng)基除菌的發(fā)展方向，它可低限度地減少培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)損失。

1.1 濕熱滅菌
    蒸汽在冷凝時(shí)釋放出大量潛能，并且蒸汽具有強(qiáng)大穿透力，蒸汽的濕熱破壞菌體蛋白質(zhì)和核酸的化學(xué)鍵使酶失活，微生物因代謝障礙而死亡。濕熱滅菌的效果取決于致死溫度和致死時(shí)間。致死溫度是殺滅微生物的極限溫度。致死時(shí)間是在致死溫度下殺滅全部微生物所需時(shí)間。
    高壓蒸汽滅菌適合于耐高溫培養(yǎng)基、接種器械和蒸餾水的滅菌。滅菌時(shí)一般是在121℃、15psi，15分鐘的條件下完全可達(dá)到滅菌效果及營(yíng)養(yǎng)成分的最小損失，不需將滅菌時(shí)間延長(zhǎng)。為保證高壓滅菌的效果，滅菌設(shè)備的驗(yàn)證很關(guān)鍵。

1.2 過(guò)濾滅菌
   可供過(guò)濾滅菌使用的濾膜很多，其材料多為聚醚砜（PES）膜、聚偏二氟乙烯（PVDF）膜、聚四氟乙烯（PTFE）膜、醋酸纖維素、硝酸纖維素等等。一般采用正壓過(guò)濾，正壓過(guò)濾較之負(fù)壓過(guò)濾具有高流速、過(guò)濾快、不易污染，可避免蛋白質(zhì)產(chǎn)生大量氣泡等優(yōu)點(diǎn)。

   目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室和制藥企業(yè)采用微孔濾膜、一體式過(guò)濾器（囊式過(guò)濾器）或筒式濾芯除菌。微孔濾膜需配套不銹鋼夾具，中間可夾放0.22um濾膜。使用這種濾器最重要步驟是安裝濾膜及無(wú)菌過(guò)濾過(guò)程。筒式濾芯亦需配套不銹鋼濾殼。如果是少量過(guò)濾(<200ml)可選配針頭過(guò)濾器。